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核酸提取试剂使用常见问题有哪些?

时间:2023-01-04 04:01:49 来源:洛阳慧庆生物科技有限公司
  想要从生物样本中提取出核酸,离不开核酸提取试剂的辅助,利用核酸提取试剂从生物样本中提取核酸时,可能会遇到一些问题,影响到核酸提取的结果。那么核酸提取试剂使用常见问题有哪些呢?针对这个问题,慧庆小编为大家总结了一些内容,接下来就为大家带来相关介绍。
  

  一、核酸提取试剂提取DNA常见问题

  

  1、提取的细菌基因组DNA有降解

  
  出现这种情况建议先确认选用的培养菌体是否新鲜,如果菌体需要进行储存时,请将其保存在零下80℃的环境中。还有一种原因可能是起始菌液量过多,导致菌液裂解不充分,部分DNA降解。由于菌体本身富含DNA酶活性,建议先加入消解溶液然后再加入EDTA溶液来抑制内源性核酸酶,解决DNA降解问题。
  

  2、A260/280比值较低/高

  
  A260 值比较低可能是由于用水作为洗脱液,或是有蛋白质残留。如果在操作过程中使用了苯酚,那么很有可能是由于苯酚残留导致比值低。比值高的原因是由于有大量的RNA残留,或者是没有使用RNaseA,或RNaseA活性下降。
  

  3、提取的DNA活性差

  
  原因有两点,一个是提取的基因组DNA中盐分浓度过高,这种情况建议操作时严格安装说明书进行操作。另一个是由于提取的基因组DNA中含有乙醇,建议离心的速度和时间应该严格遵循说明书要求进行。
  核酸提取试剂

  二、核酸提取试剂提取RNA常见问题

  

  1、RNA得率低

  
  原因可能是由于该组织或是细胞中RNA的含量偏低。不同的生物细胞和组织中RNA的丰度是不同的,比如肝脏、心脏以及胰腺等是RNA高丰度的组织,而胚胎、肾脏、肺、脑、胸腺以及卵巢等属于中丰度组织,低丰度的组织分别是脂肪、骨以及膀胱。
  
  其次样本量过少或者过多也会导致RNA得率低。样本量过少,细胞中RNA含量低,得率自然也低;样本量过多则很有可能超过了裂解液的裂解能力范围,导致裂解不完全,使得得率降低。
  

  2、RNA降解

  
  导致RNA讲解的原因有三点,提取材料不新鲜、处理样品的量太大以及RNase被污染。新鲜组织取得后应立即置于液氮中或立即放入RNAstore试剂中,以保证提取效果。
  

  3、RNA中有基因组DNA污染

  
  导致这种情况发生的原因有几点,一个是样本中的核酸含量过高,提取过程中没有去除干净,建议进行多次抽提。其次是RNA的沉淀条件不合适,使得DNA也被提取出来。还有就是溶液的 pH 值偏小,容易使 DNA 形成沉淀。
  
  以上就是慧庆小编针对核酸提取试剂使用常见问题有哪些问题带来的相关介绍,希望能够对大家有所帮助。如果您还有其他疑惑,欢迎随时来电咨询洛阳慧庆生物科技有限公司,我们会及时解答您的疑惑。
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