磁珠法核酸提取常见问题的原因分析及解决办法

  磁珠法核酸提取常见问题的原因分析及解决办法：

  问题1、磁珠残留

  原因：(1)磁珠：粒径小、表面基团松散磁含量低；(2)设备：磁分离方式、磁场弱；(3)操作：参数设置不合适。
  解决办法：(1)筛选、替换匹配的磁珠； (2)更换磁珠；(3)放慢磁介入速度并延长吸附时间。

  问题2、磁珠结块

  原因：(1)微球吸附过多杂质(蛋白、脂质、多糖)； (2)微球粒径太小；(3)洗涤完毕，乙醇干燥时间过长。
  解决办法：(1)优化裂解液结合液配方； (2)选择粒径较大的微球；(3)缩短干燥时间。

  问题3、纯度差

  原因：(1)裂解不充分； (2)微球分散性不好； (3)微球吸附能力太强。
  解决办法：(1)优化试剂裂解液配方； (2)筛选合适粒径及表面的磁珠；(3)磁珠表面钝化处理。

  问题4、得率低

  原因：(1)磁珠吸附能力较弱； (2)磁珠洗脱效率较弱；(3)提取试剂(pH、盐、醇)与磁珠不匹配。
  解决办法：(1)改变表面基团种类及密度；(2)减少干燥时间、加热洗脱；(3)优化试剂配方。

  关键因子及对提取的影响

  在进行核酸提取或纯化时，必须密切注意一些因素，如pH值、盐浓度、温度、缓冲体积和潜在的乙醇污染。这些因素中的每一个都会极大地影响下游实验的得率、质量和成功率。
  1.非最适pH值或盐浓度可改变核酸的电荷，导致核酸不能与离心柱结合，或导致苯酚/氯仿错误的溶解核酸。
  2.缓冲液体积不正确，可导致不完全裂解，中和或间接稀释洗脱的核酸。
  3.乙醇污染可以抑制下游的酶反应，并使样品从琼脂糖凝胶中飘浮出来。
  磁珠法核酸提取可以简单、快速、高效地实现多种类型样本的核酸提取；不仅可以节省时间，还可以减少手工操作引起的失误，提高每次实验结果的可重复性及均一性。

  

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