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磁珠法核酸提取常见问题的原因分析及解决办法

时间:2022-05-18 09:48:35 来源:洛阳慧庆生物科技有限公司
  磁珠法核酸提取常见问题的原因分析及解决办法:


  问题1、磁珠残留

  原因:(1)磁珠:粒径小、表面基团松散磁含量低;(2)设备:磁分离方式、磁场弱;(3)操作:参数设置不合适。
  解决办法:(1)筛选、替换匹配的磁珠; (2)更换磁珠;(3)放慢磁介入速度并延长吸附时间。


  问题2、磁珠结块

  原因:(1)微球吸附过多杂质(蛋白、脂质、多糖); (2)微球粒径太小;(3)洗涤完毕,乙醇干燥时间过长。
  解决办法:(1)优化裂解液结合液配方; (2)选择粒径较大的微球;(3)缩短干燥时间。


  问题3、纯度差

  原因:(1)裂解不充分; (2)微球分散性不好; (3)微球吸附能力太强。
  解决办法:(1)优化试剂裂解液配方; (2)筛选合适粒径及表面的磁珠;(3)磁珠表面钝化处理。


  问题4、得率低

  原因:(1)磁珠吸附能力较弱; (2)磁珠洗脱效率较弱;(3)提取试剂(pH、盐、醇)与磁珠不匹配。
  解决办法:(1)改变表面基团种类及密度;(2)减少干燥时间、加热洗脱;(3)优化试剂配方。


  关键因子及对提取的影响

  在进行核酸提取或纯化时,必须密切注意一些因素,如pH值、盐浓度、温度、缓冲体积和潜在的乙醇污染。这些因素中的每一个都会极大地影响下游实验的得率、质量和成功率。
  1.非最适pH值或盐浓度可改变核酸的电荷,导致核酸不能与离心柱结合,或导致苯酚/氯仿错误的溶解核酸。
  2.缓冲液体积不正确,可导致不完全裂解,中和或间接稀释洗脱的核酸。
  3.乙醇污染可以抑制下游的酶反应,并使样品从琼脂糖凝胶中飘浮出来。
  磁珠法核酸提取可以简单、快速、高效地实现多种类型样本的核酸提取;不仅可以节省时间,还可以减少手工操作引起的失误,提高每次实验结果的可重复性及均一性。

  

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